「陈巍学基因」视频11—单细胞mRNA测序建库原理

1.两大难题

  • 要高扩增且均一覆盖
    一个人类细胞总RNA大约只有10pg左右，mRNA大约只有0.2pg，要获得零点几微克的核酸文库，扩增量需几百万倍以上，而PCR扩增过程中会产生扩增偏差（PCR偏差），即一部分DNA片段被大量扩增，从而导致高通量测序只能测到很少一部分的片段序列
  • 要高效得到mRNA测序文库
    rRNA在总RNA中占了95%以上
    mRNA在总RNA中只占了2-3%

    • 2.建库方法

    Clontech公司 SMART法